0 引言

       自闭症谱系障碍（autism spectrum disorder, ASD）是一类以社会交往障碍、言语与非言语交流受损以及重复刻板行为和兴趣受限为核心特征的神经发育性疾病^{[1, 2]}。近年来，全球范围内ASD的患病率呈持续上升趋势，据美国疾病控制与预防中心最新发布的数据，美国8岁儿童ASD患病率已由2000年的约1/150上升至2023年报告的1/31左右^[3]，对个体、家庭及社会造成了沉重负担。ASD的病因机制未明，目前普遍认为与多种因素有关，包括遗传、环境以及遗传与环境交互作用等^[4]。尽管ASD的临床表现具有高度异质性，其潜在的神经生物学机制仍未完全阐明^[5]，这在一定程度上限制了客观诊断标志物和精准干预策略的发展。

       静息态功能磁共振成像（resting-state functional magnetic resonance imaging, rs-fMRI）因其无须任务配合、可反映大脑自发神经活动特征，已成为研究ASD脑功能异常的重要工具。静态低频振幅（static amplitude of low-frequency fluctuation, sALFF）作为一种反映局部神经活动强度的指标，能够量化血氧水平依赖信号在低频范围内的振幅变化，已被广泛应用于多种神经精神疾病的研究^[6]。既往研究表明，ASD患者在前额叶、默认模式网络及感觉运动相关脑区存在ALFF异常，这些改变可能与社会认知障碍及刻板行为等核心症状密切相关^{[7, 8]}。

       然而，人类大脑的活动是随时间动态改变的^[9]，传统ALFF分析通常基于整个扫描时间序列的平均特征^[10]，隐含假设大脑功能活动在时间维度上相对稳定，难以反映神经活动的动态变化特性。近年来，越来越多的研究表明，大脑静息态活动具有显著的时间动态性^{[11, 12]}，其短时间尺度内的波动可能承载重要的病理信息^{[13, 14]}。基于此，动态低频振幅（dynamic amplitude of low-frequency fluctuation, dALFF）方法应运而生，该方法通过滑动时间窗技术量化ALFF在时间维度上的变异性，为刻画大脑功能活动的动态特征提供了新的视角^[15]。已有研究提示，动态指标在抑郁症、精神分裂症以及注意缺陷/多动障碍等精神疾病中较静态指标更为敏感^{[16, 17, 18, 19]}，但其在ASD中的应用仍相对有限，相关研究结果亦不一致。

       除功能影像学异常外，ASD的发生发展还被认为与多种神经递质系统功能失衡密切相关^[20]。其中，多巴胺系统在奖赏加工、动机调节及重复行为形成中发挥重要作用^[21]，其受体功能异常被认为可能参与ASD刻板行为的病理机制^[22]。此外，5-羟色胺系统在神经发育、突触可塑性及情绪与行为调控中具有关键作用^{[23, 24, 25]}，既往研究提示，ASD患者可能与5-羟色胺能水平的异常有关^{[26, 27, 28]}。然而，宏观脑功能改变与微观神经递质分布之间的对应关系仍缺乏系统性研究。

       近年来，新兴的JuSpace工具箱通过提供基于正电子发射断层扫描和单光子发射计算机断层扫描构建的神经递质受体/转运体空间分布模板，为探索功能影像学改变的分子基础提供了新的可能^[29]。CHEN等利用JuSpace工具箱，探索了药物无效的良性癫痫儿童结构-功能变化与神经递质图之间的空间相关性，发现了相互关联的结构-功能成分，并与血清素能、去甲肾上腺素能和谷氨酸能神经递质系统有关^[30]。YANG等通过分析精神分裂症梯度指标与该神经递质图谱的空间相关性，得出不同亚型的神经生物学特征^[31]。通过空间相关分析方法，将rs-fMRI差异脑图与神经递质分布模板进行整合，有助于从系统层面揭示功能异常背后的潜在神经化学机制。

       基于上述背景，本研究利用ABIDE数据库的rs-fMRI数据，系统分析ASD青少年静态与动态ALFF的异常特征，进一步探讨其与临床刻板行为症状的关系，并结合神经递质受体/转运体空间分布模板，探索功能异常的分子影像学基础，旨在为ASD的神经生物学机制研究及潜在影像学标志物的开发提供新的证据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

       本研究为回顾性病例对照研究。自闭症脑影像数据交换数据库（Autism Brain Imaging Data Exchange, ABIDE）（http://fcon_1000.projects.nitrc.org/indi/abide）^[7]，为公开多中心匿名神经影像数据集，研究者完成注册并签署数据使用协议后可获取全部数据，仅限非商业科研使用。本团队通过正规申请获得ABIDE数据库访问权限并签署了数据使用协议，从ABIDE数据库筛选57例ASD青少年及71例年龄、性别匹配的健康对照作为研究对象。所有原始数据均已通过各参与中心伦理委员会审批，且所有受试者或其监护人签署了知情同意书。本研究基于公开数据进行二次分析，不涉及新的受试者招募及干预措施。

       本研究中，ASD组的纳入标准：（1）年龄为7~18岁；（2）ABIDE-Ⅰ受试者依据《精神障碍诊断与统计手册》第四版诊断为ASD，ABIDE-Ⅱ受试者依据《精神障碍诊断与统计手册》第五版确诊为ASD；（3）右利手；（4）有完整的量表信息。健康对照（healthy controls, HC）组的纳入标准：（1）与ASD组年龄、性别匹配；（2）右利手；（3）无重度抑郁症、精神分裂症、创伤性脑损伤等神经或精神疾病史。ASD组及HC组的排除标准：全智商（full-scale intelligence quotient, FIQ）>130或FIQ<60者。本研究基于公开数据库ABIDE-Ⅰ、ABIDE-Ⅱ开展回顾性分析，研究方案未实施前瞻性样本量估算。样本量由满足纳入、排除标准后可获取的有效被试数量决定。为降低统计假阳性风险，所有统计分析采用GRF或FDR多重比较校正以控制Ⅰ类错误。所有受试者均具备完整的静息态功能磁共振数据、人口学资料及FIQ信息。ASD组刻板行为严重程度采用自闭症诊断观察量表（Autism Diagnostic Observation Schedule, ADOS）中刻板行为维度评分进行评估^[32]，采用量表原始粗分，而非标准化校准严重程度评分（Calibrated Severity Scores, CSS），CSS计算依赖ADOS版本、模块、年龄与完整算法分项得分。ABIDE数据集包含ADOS-G、ADOS-2多种版本，部分Module 4无成熟CSS换算标准；筛选能够规范计算CSS的受试者会造成样本大量丢失，诱发选择偏倚，故选取原始粗分开展分析。

1.2 影像数据预处理

       所有静息态功能磁共振影像数据均在MATLAB 2022b平台下基于DPABI V9.0工具箱和SPM 12软件进行预处理^[33]。为保证分析结果的可靠性和一致性，采用统一的标准化流程进行数据处理。首先去除每位受试者前10个时间点，以减少磁场不稳定和受试者适应扫描环境所带来的影响。随后进行时间层校正，以消除不同层面采集时间差异对信号的影响。之后进行头动校正，计算每个时间点相对于首个时间点的平移和旋转参数。为保证数据质量，本研究设定严格的头动排除标准，即任意方向平移超过2 mm或旋转超过2°的受试者予以剔除。随后将功能图像配准至个体结构像，并进一步标准化至蒙特利尔神经学研究所（Montreal Neurological Institute, MNI）标准空间，重采样体素大小为3 mm×3 mm×3 mm。为提高信噪比并减少个体间解剖差异影响，采用全宽半高为6 mm的高斯核进行空间平滑处理。在时间序列层面，进行线性趋势去除以消除低频漂移影响，并回归头动参数、白质信号和脑脊液信号等协变量，以降低非神经源性噪声干扰。最后采用带通滤波（0.01~0.08 Hz）提取低频波动信号用于后续ALFF分析。

1.3 sALFF与dALFF的计算

       sALFF的计算基于预处理后的时间序列数据。对每个体素的时间序列进行快速傅里叶变换，获得其功率谱密度分布，并计算0.01~0.08 Hz频段内功率谱的平方根平均值作为该体素的ALFF值。为消除多扫描站点带来的仪器、扫描参数批次混杂偏差，本研究采用 MATLAB R2022b中的ComBat算法对全部提取的影像指标进行批次效应校正^[34]，校正时将扫描站点作为批次变量，同时纳入年龄、性别、平均逐帧位移（mean framewise displacement, FD）作为协变量，剔除与站点无关的个体真实生理差异。同时，为减少个体整体信号强度差异的影响，将每位受试者的ALFF值进行全脑平均标准化处理，得到标准化的sALFF图像。

       dALFF的计算采用滑动时间窗方法，以刻画脑功能活动在时间维度上的变异特征。研究表明，窗长是使用滑动时间窗方法计算静息状态动力学的关键参数^{[35, 36]}。本研究选取50个重复时间（repetition time, TR）作为滑动窗口长度，该设置有两点依据：第一，该窗口包含充足时间点（至少覆盖一个完整振荡周期），可完整覆盖本研究关注的低频频段（0.01~0.08 Hz）^[37]，过短的窗口长度可能会导致虚假波动^[38]；第二，该长度能够平衡动态功能连接分析的特异度与敏感度，足够长的窗口可捕捉稳定可信的动态波动信号，同时窗口未过度延展，可客观表征脑功能的瞬时动态变化^{[39, 40, 41]}。设定50个TR时间窗+1 TR步长，将170个时间点分为121个窗口，计算每个窗口内每个参与者的ALFF图。随后计算各时间窗ALFF值的标准差，用以反映该体素在扫描期间的动态波动程度。标准差值越大，表明该区域神经活动的时间变异性越高。最终对所得dALFF图像进行全脑标准化处理，以提高组间比较的可比性。本研究同时测试了55个TR+1个步长、60个TR+1个步长两种窗口长度，结果显示核心研究结论未发生改变。

1.4 统计功效分析

       本研究为基于ABIDE-Ⅰ、ABIDE-Ⅱ公开数据库的回顾性研究，未开展前瞻性样本量估算，故采用G*Power 3.1软件开展事后统计功效分析，评估现有样本的检验效能。采用独立样本t检验模型，设置双侧检验水准α=0.05，ASD组57例，HC组71例。结果显示，在中等效应量Cohen's d=0.50条件下，本研究事后统计功效（1-β）≈0.80（实际计算值为0.796 7）。提示本研究对中等及以上效应具备较好检验效能。

1.5 统计学分析

       人口学及临床资料的统计分析采用SPSS 27.0软件完成。性别分布采用卡方检验进行比较，年龄、mean FD及FIQ采用双样本t检验进行分析，计量资料以均数±标准差表示。所有统计检验均为双侧检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

       影像学组间比较在SPM12平台上进行体素水平双样本t检验，以比较ASD组与HC组在sALFF及dALFF指标上的差异。在统计模型中纳入年龄、性别、mean FD及FIQ作为协变量，以控制潜在混杂因素的影响。多重比较校正采用高斯随机场（Gaussian random field, GRF）方法，设定体素水平P<0.001，团簇水平P<0.05为差异具有统计学意义。

       对于组间差异显著的脑区，提取其平均sALFF或dALFF值，在ASD组内采用Pearson相关分析探讨其与ADOS刻板行为评分之间的关系，以评估功能异常与临床症状严重程度之间的联系。

1.5 分子影像空间相关分析

       为了研究sALFF或dALFF值与特定受体/转运体表达之间的关系，使用JuSpace工具箱计算Spearman相关系数^[29]。我们考虑了多巴胺受体（D1、D2和¹⁸F-氟多巴）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine, 5-HT）受体（5-HT1a、5-HT1b、5-HT2a、5-HT4和5-HT6）、γ-氨基丁酸A型受体（γ-aminobutyric acid A receptor, GABAa）和囊泡乙酰胆碱转运体（vesicular acetylcholine transporter, VAChT）。为控制多重比较错误，采用错误发现率（false discovery rate, FDR）进行校正，以q<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 人口学及临床特征

       本研究纳入三个站点（NYU、USM、NYU1）的463例被试，包括ASD组285例，HC组178例，去除不符合年龄范围的224例，不符合FIQ条件的27例，ADOS量表完全缺失的13例，利手分数小于50的71例，最终纳入ASD组57例（男52例，女5例），HC组71例（男61例，女10例）。两组性别和年龄差异无统计学意义（P>0.05）。ASD组FIQ低于HC组（P<0.001）。考虑到认知水平可能对功能影像指标产生影响，在后续影像学统计分析中将FIQ作为协变量进行控制。见表1。

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表1  ASD组与健康对照组人口学及临床特征比较
Tab. 1  Comparison of demographic and clinical characteristics between ASD group and HC group

2.2 sALFF组间差异结果

       在控制年龄、性别及FIQ后，对全脑sALFF进行双样本t检验分析。结果显示，与HC组相比，ASD组在左侧内侧眶部额上回sALFF降低，GRF校正后差异仍具有统计学意义（体素水平P<0.001，团簇水平P<0.05）（图1）。该团簇主要位于前额叶内侧眶部区域，呈现单一显著脑区分布。未观察到ASD组相对于HC组sALFF显著升高的脑区。

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图1  ASD组与HC组sALFF组间差异的脑区及其神经递质空间相关分析结果。1A：ASD组左侧内侧眶部额上回sALFF显著降低，右侧色标为t值范围（-4.5~-1.5），颜色越深t值越大；1B：差异脑区与D1受体密度呈负相关，与D2受体密度呈正相关。ASD：自闭症谱系障碍；HC：健康对照；sALFF：静态低频振幅；ORBsupmed.L：左侧内侧眶部额上回。
Fig. 1  Brain regions showing significant differences in sALFF between the ASD group and HC group, and results of their spatial correlation analysis with neurotransmitters. 1A: sALFF in the left medial orbital superior frontal gyrus is significantly decreased in the ASD group. The color bar on the right represents the t-value range from -4.5 to -1.5, with darker colors indicating larger t-values. 1B: The differential brain region is negatively correlated with D1 receptor density and positively correlated with D2 receptor density. ASD: autism spectrum disorder; HC: healthy controls; sALFF: static amplitude of low-frequency fluctuation; ORBsupmed.L: left medial orbital superior frontal gyrus.

2.3 dALFF组间差异结果

       在相同协变量控制条件下，对dALFF进行组间比较。结果显示，与HC组相比，ASD组在左侧额中回及左侧眶部额中回dALFF升高，GRF校正后差异仍具有统计学意义（体素水平P<0.001，团簇水平P<0.05）（图2）。显著脑区主要集中于左侧前额叶背外侧及眶部区域，呈相邻团簇分布。未发现ASD组dALFF显著降低的脑区。

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图2  ASD组与HC组dALFF组间差异的脑区及其神经递质空间相关分析结果。2A：ASD组左侧额中回dALFF显著升高，右侧色标为t值范围（2.1~4.9），颜色越亮t值越大；2B：ASD组左侧额中回dALFF与神经递质受体密度未见明显相关性；2C：ASD组左侧眶部额中回dALFF显著升高，右侧色标为t值范围（0.9~4.5），颜色越亮t值越大；2D：ASD组左侧眶部额中回dALFF与5-HT4受体及多巴胺D1受体密度呈正相关，与5-HT1a受体、多巴胺D2受体密度及¹⁸F-氟多巴摄取分布呈负相关。ASD：自闭症谱系障碍；HC：健康对照；dALFF：动态低频振幅；MFG.L：侧额中回；ORBmid.L：左侧眶部额中回。
Fig. 2  Brain regions with significant between-group differences in dALFF between the ASD group and HC group and their spatial correlation analysis with neurotransmitters. 2A: dALFF in the left middle frontal gyrus is significantly increased in the ASD group. The color bar on the right represents the t-value range of 2.1 to 4.9, and brighter colors correspond to larger t-values. 2B: There is no significant correlation between dALFF in the left middle frontal gyrus and neurotransmitter receptor density in the ASD group. 2C: dALFF in the orbital part of the left middle frontal gyrus is significantly increased in the ASD group. The color bar on the right represents the t-value range of 0.9 to 4.5, and brighter colors correspond to larger t-values. 2D: In the ASD group, dALFF in the orbital part of the left middle frontal gyrus is positively correlated with the density of 5-HT4 receptors and dopamine D1 receptors, and negatively correlated with the density of 5-HT1a receptors, dopamine D2 receptors, and ¹⁸F-FDOPA uptake distribution. ASD: autism spectrum disorder; HC: healthy controls; dALFF: dynamic amplitude of low-frequency fluctuation; MFG.L: left middle frontal gyrus; ORBmid.L: orbital part of the left middle frontal gyrus.

2.4 异常脑区与临床症状的相关性分析

       在ASD组内进一步进行相关分析。结果显示，左侧内侧眶部额上回sALFF与ADOS刻板行为评分存在弱正相关（r=0.263，未校正P=0.048）（图3A）。左侧眶部额中回dALFF与ADOS刻板行为评分亦呈弱正相关（r=0.294，未校正P=0.026），两处关联均未通过FDR多重比较校正（图3B）。其余显著脑区在FDR校正后未发现与ADOS评分存在相关关系（P>0.05）。

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图3  异常脑区sALFF及dALFF与ADOS刻板行为评分的相关性分析。3A：左侧内侧眶部额上回sALFF值与ADOS刻板行为评分呈正相关（r=0.263，未校正P=0.048）；3B：左侧眶部额中回dALFF值与ADOS刻板行为评分呈正相关（r=0.294，未校正P=0.026）。sALFF：静态低频振幅；dALFF：动态低频振幅；ADOS：自闭症诊断观察量表。
Fig. 3  Correlation analysis of sALFF and dALFF in abnormal brain regions with ADOS stereotyped behavior scores. 3A: The sALFF value of the left medial orbital superior frontal gyrus is positively correlated with the ADOS stereotyped-behavior score (r = 0.263, uncorrected P = 0.048); 3B: The dALFF value of the left orbital middle frontal gyrus is positively correlated with the ADOS stereotyped-behavior score (r = 0.294, uncorrected P = 0.026). sALFF: static amplitude of low-frequency fluctuation; dALFF: dynamic amplitude of low-frequency fluctuation; ADOS: Autism Diagnostic Observation Schedule.

2.5 分子影像空间相关分析结果

       在sALFF方面，ASD组与HC组在左侧内侧眶部额上回sALFF差异与多巴胺D1受体密度分布呈负相关（r=-0.73，q<0.01），与多巴胺D2受体密度分布呈正相关（r=0.92，q<0.01），见图1B。其余神经递质模板相关性未达到统计学显著水平。在dALFF方面，ASD组与HC组在左侧眶部额中回差异脑图与5-HT4受体密度分布呈正相关（r=0.43，q<0.01），与多巴胺D1受体密度分布呈正相关（r=0.42，q<0.01），与5-HT1a受体密度分布呈负相关（r=-0.23，q<0.05），与多巴胺D2受体密度分布呈负相关（r=-0.65，q<0.01），并与¹⁸F-氟多巴摄取分布呈负相关（r=-0.50，q<0.01），见图2D。上述空间相关性分析结果经FDR多重比较校正后差异仍具有统计学意义，提示ASD功能异常脑区的空间分布与多巴胺及5-羟色胺系统的空间分布具有对应关系。ASD组与HC组在左侧额中回差异脑图与神经递质受体密度分布均未见明显相关性，见图2B。

3 讨论

       本研究基于ABIDE数据库，系统分析了ASD青少年静态与dALFF异常特征，并进一步探讨其与刻板行为症状及神经递质系统分布之间的关系。主要发现包括：（1）ASD组在左侧内侧眶部额上回sALFF显著降低；（2）ASD组在左侧额中回及左侧眶部额中回dALFF显著升高；（3）异常脑区功能指标与ADOS刻板行为评分存在相关趋势，且dALFF相关性略强；（4）功能异常脑区与多巴胺及5-羟色胺系统空间分布存在显著相关。上述结果从静态与动态两个维度揭示了ASD前额叶局部神经活动异常，并提供了潜在的分子影像学解释。

3.1 ASD青少年前额叶静态与动态脑活动异常

       本研究发现ASD青少年左侧内侧眶部额上回sALFF显著降低。ALFF指标能够反映局部脑区自发神经活动强度^[6]，其降低通常提示该区域基线神经活动水平减弱^[42]。前额叶内侧眶部在情绪调节、奖赏加工及社会决策过程中发挥重要作用^{[43, 44]}。既往基于ABIDE的大样本研究已提示ASD个体在默认模式网络及前额叶区域存在功能异常^[7]。此外，静息态网络研究显示，前额叶区域在ASD中常表现出功能连接异常^[8]。本研究从局部神经活动强度角度进一步补充了上述发现，提示前额叶内侧眶部区域在ASD中可能存在功能低活动状态。

       除静态异常外，本研究发现ASD组在左侧额中回及左侧眶部额中回dALFF显著升高。动态变异性升高可能反映前额叶区域功能稳定性下降或神经活动调控能力减弱。在精神分裂症和双相情感障碍等疾病中，动态功能指标已被证明对病理状态更加敏感^[45]。本研究中dALFF异常脑区范围较sALFF更广，且与临床症状相关趋势更强。YUE等在一项成人ASD患者区域神经活动的动态性改变研究中发现，成人ASD患者的大脑动态区域功能异常的范围很广^[46]。这与我们的研究结果趋势一致，提示时间维度上的神经活动波动可能是ASD脑功能异常的重要特征。

3.2 前额叶脑活动异常与刻板行为关联

       在ASD组内，左侧内侧眶部额上回sALFF及左侧眶部额中回dALFF均与ADOS刻板行为评分呈现正向相关趋势，其中dALFF存在更强的关联趋势。刻板行为是ASD的核心症状之一^[47]，其发生机制可能与前额叶执行控制功能异常有关。前额叶是人类最晚完成成熟发育的脑区^[48]，ASD会显著破坏前额叶神经元放电时序同步性^[49]，这类短时程、动态的神经调控损伤难以被静态平均指标捕捉^[50]。前额叶区域参与行为抑制与灵活性调节^[51]，既往研究证实ASD患者该脑区瞬时神经活动稳定性受损、动态波动幅度异常升高；相较于平稳的基线活动水平，这种动态时序紊乱能够更直接地反映刻板行为的神经病理基础^[52]，这也解释了本研究中dALFF与临床症状关联效应更强的观测结果。

3.3 脑功能异常与神经递质系统的空间关联

       空间相关分析显示，sALFF异常与多巴胺D1、D2受体密度分布相关，而dALFF异常与D1、D2、5-HT4及¹⁸F-氟多巴分布存在相关。多巴胺系统在奖赏加工与重复行为形成中具有重要作用^{[22, 53]}，已有研究提出多巴胺假说可能解释ASD部分行为特征^[54]。有研究利用PET成像技术发现，ASD患者在纹状体区域的多巴胺D2受体分布可用性显著降低，且这种降低与患者的刻板行为和社交功能缺陷相关^[55]，证明多巴胺受体水平的异常与ASD核心症状的直接关联。这也与本研究的结果一致，即左侧眶部额中回dALFF与D2受体密度分布均呈负相关。另外，本研究发现功能异常脑区空间分布与D1、D2受体密度分布呈相反方向相关，提示不同受体亚型可能在ASD神经活动调控中发挥差异化作用。

       此外，5-HT系统在神经发育与突触可塑性调节中具有重要意义。既往研究已证实，ASD患儿外周血5-HT水平显著升高，并与刻板行为等核心症状严重程度呈正相关，提示5-HT系统功能亢进是ASD重要病理特征^{[56, 57]}。本研究从中枢受体层面发现，左侧眶部额中回的dALFF值与5-HT4受体密度分布呈正相关，且与ADOS刻板行为量表得分呈正相关趋势，提示该脑区5-HT4受体密度分布增加可能通过增强局部神经活动参与刻板行为的发生。上述结果与外周5-HT异常的研究结论方向一致、互为补充，进一步从中枢受体-脑功能-行为层面印证了5-HT系统异常在ASD病理生理机制中的重要作用。通过JuSpace工具进行空间相关分析^[29]，本研究在宏观功能异常与微观神经递质分布之间建立了联系，为理解ASD脑功能异常的分子基础提供了新的视角。

3.4 本研究的优势与局限性

       本研究的一个重要特点在于同时整合静态与动态指标。传统静态ALFF分析基于时间序列平均特征，可能忽略时间维度上的病理信息，动态分析方法的引入使得对脑功能波动性的刻画更加全面^[58]。本研究结果显示，动态指标在异常脑区范围及症状相关性方面均表现出更高敏感性，提示未来ASD影像学研究可进一步重视时间维度特征。本研究亦存在一定局限。首先，本研究为回顾性数据库研究，无前瞻性样本量规划，事后功效分析提示对小效应脑区检验效能有限，部分微弱脑功能改变可能漏检，有待更大样本队列验证结果。本研究样本源于多中心，虽已对扫描参数进行统计控制，但仍可能存在残余混杂；数据库男性占比高，女性样本不足，本研究脑活动与刻板行为的关联结果更适用于男性ASD青少年，难以直接推广至女性ASD群体。既往研究证实男女ASD存在脑功能与临床症状的性别异质性^{[59, 60]}，现有女性样本量不足以开展可靠分层分析。未来需扩充女性ASD独立样本，进一步验证性别调控效应。另外ADOS量表采用原始分，其跨样本可比性不及CSS；后续可依托公开换算表，结合受试者模块编号、年龄及原始粗分换算得到CSS，开展重复相关分析做稳健性校验。其次，ASD组与HC组基线FIQ评分存在差异，虽将FIQ评分纳入协变量校正，但认知水平可广泛影响脑功能，单纯协变量控制难以完全消除认知混杂，结果解读需谨慎。再次，本研究为横断面研究，无法推断因果关系。最后，神经递质模板基于健康成年人PET/SPECT研究^[29]，尚无青少年专用板，青少年递质系统存在发育重塑，使用成人模板会带来年龄相关偏差，可能高估或低估递质与脑功能的关联强度，甚至轻微改变相关效应的空间分布模式。

4 结论

       综上所述，本研究表明ASD青少年在前额叶区域存在静态及动态局部神经活动异常，其中动态神经活动变异性与刻板行为症状关系更为密切。功能异常脑区空间分布与多巴胺及5-HT系统密切相关。上述结果为理解ASD的神经生物学机制提供了新的影像学线索。